Kuidas TBE puhvrit teha 3 lihtsat sammu

Seda puhvrit kasutatakse DNA elektroforeesi eraldamiseks

TBE puhver on puhverlahus, mis koosneb Tris-alusest, boorhappest ja EDTA-st (või Tris-boraat-EDTA-st kokku). Seda puhvrit kasutatakse sageli agaroosgeel-elektroforeesiks PCR amplifikatsioonist, DNA puhastamise protokollidest või DNA kloonimise eksperimentidest pärinevate DNA-de analüüsimisel.

TBE puhver on eriti kasulik väiksemate DNA fragmentide (MW <1000) eraldamiseks, näiteks restriktsiooniensüümide digestidest saadud väikesteks toodeteks.

TBE-l on suurem puhverdusvõime ja see annab teravama resolutsiooni kui TAE puhver . TAE puhver on lahus, mis koosneb Tris-base, äädikhappest ja EDTA-st (Tris-atsetaat-EDTA).

TBE on üldiselt kallim kui TAE ja inhibeerib DNA ligaasi, mis võib põhjustada probleeme, kui on ette nähtud järgnevad DNA puhastamis- ja ligeerimisetapid. Järgmiste kolme lihtsa sammuga saate teada, kuidas TBE-puhvrit teha. Selle puhvri loomiseks ei tohiks seda aega võtta rohkem kui 30 minutit. Nii toimige järgmiselt.

Valmistatakse EDTA varulahus

EDTA (etüleendiamiintetraäädikhappe) lahus tuleks ette valmistada enneaegselt. EDTA ei lahustu täielikult, kuni pH on reguleeritud umbes 8,0-ni. 0,5 ml EDTA lahuses oleva 500-milliliitri põhilahuses kaalutakse 93,05 g EDTA dinaatriumsoola (FW = 372,2). Seejärel lahutage see 400 ml deioniseeritud vees ja reguleerige pH NaOH-ga. Seejärel lisage lahus lõppmahuni 500 milliliitrit.

Valmistage TBE varulahus

Teosta kontsentreeritud (5 korda) TBE põhilahust, kaaludes 54 g Trisi alust (FW = 121,14) ja 27,5 g boorhapet (FW = 61,83) ja lahustades nii ligikaudu 900 ml deioniseeritud vees. Seejärel lisage 20 milliliitrit 0,5 M EDTA (pH 8,0) ja reguleerige lahus lõppmahuga 1 liitrit.

Seda lahust võib hoida toatemperatuuril, kuid vanemates lahustes moodustub sade. Säilitage puhver klaaspudelites ja visake ära, kui sade on moodustunud.

Valmistage TBE töölahus

Agaroosgeelelektroforeesi korral võib TBE puhvrit kasutada kontsentratsioonil 0,5x (1:10 kontsentreeritud aine lahjendus). Lahjendage põhilahust deioniseeritud veega 10 korda. Lõpp-lahustunud kontsentratsioonid on 45 mM Tris-boraat ja 1 mM EDTA. Puhver on nüüd valmis kasutamiseks agaroosgeelil .

Mida sa vajad

TBE puhvri tegemiseks vajate ainult nelja ainet. Ülejäänud nimekirjad on varustus. Neli nõutavat ainet on EDTA dinaatriumsool, Tris-alus, boorhape ja deioniseeritud vesi.

Seadmete jaoks on vaja vastavalt vajadusele pH-meetrit ja kalibreerimisstandardeid. Lisaks sellele on teil vaja 600-milliliitri ja 1500-milliliitri keeduklaase või kolbi. Teie seadmete vajaduste ümardamine on gradueeritud silindrid ja segaarad ning segatakse plaate.

Enne alustamist veenduge, et teil on laboris kasutatav inventuur, mida saate kasutada, et veenduda, et teil on kõik, mida vaja. Midagi pole halvemad, kui peatuda lahenduse ettevalmistamise keskel, sest teil pole õigeid materjale.

Kui teie labor on koolis või teie töökohas, kontrollige vastavaid töötajaid, et näha, et neil on kõik varud. See võib säästa aega ja energiat lõpuks.