Kuidas teha fosfaatpuhverdatud soolalahust

Kuidas teha see immunohistokeemiline värvipuhver

Nephron (oma töö) [CC-BY-SA-3.0 (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0) või GFDL (http://www.gnu.org/copyleft/fdl.html) ] Wikimedia Commonsi kaudu

Fosfaatpuhverdatud soolalahus (PBS) on puhverlahus, mida tavaliselt kasutatakse immunohistokeemilisel (IHC) värvimisel ja seda kasutatakse sageli bioloogilistes uuringutes. PBS on veepõhine soolalahus, mis sisaldab naatriumvesinikfosfaati, naatriumkloriidi ja mõnel juhul ka kaaliumkloriidi ja kaaliumdivesinikfosfaati.

Immunohistokeemiline värvimine

Immunohistokeemia viitab selliste antigeenide nagu valkude avastamise protsessile koeosakeste rakkudes, kasutades spetsiifiliselt antigeenidele bioloogilistes kudedes seonduvate antikehade põhimõtet.

Immunofluorestsentsvärvimine oli esimene immunohistokeemiline värvimismeetod.

Antigeenid muutuvad nähtavaks konjugeeritud antikehadega konjugeeritud fluorestsentsvärvide kasutamisega antigeen-antikeha seondumisreaktsiooni tõttu. See protsess toimub siis, kui see aktiveeritakse fluorestsentsmikroskoobi all spetsiifilise lainepikkuse põnevusega.

Lahuste osmolaarsus ja ioonide kontsentratsioonid vastavad inimese kehale - nad on isotoonilised.

PBS-i retsept

PBS-i saate valmistada mitmel viisil. On mitmeid valemeid. Mõned neist ei sisalda kaaliumi, teised sisaldavad kaltsiumi või magneesiumi .

See retsept on suhteliselt lihtne. See on 10x PBS põhilahus (0,1 M). Siiski võite teha ka 1X põhilahust või alustada selle 10X retseptiga ja lahjendada seda 1X-ga.

Kogu protsess võtab umbes 10 minutit.

Tweeni lisamise võimalus on samuti esitatud.

Mida peate PBS puhvri tegema

Kuidas teha fosfaatpuhverdatud soolalahust (PBS)

Kaalutakse 10,9 g veevaba naatriumvesinikfosfaadi (Na2HP04), 3,2 g veevaba naatriumfosfaadi ühealuseline (NaH2P04) ja 90 g naatriumkloriidi (NaCl).

Lahustage veidi alla 1 liitri destilleeritud veega.

Reguleerige pH väärtusele 7,4 ja tehke lahus lõppmahuni 1 l.

Enne kasutamist lahjendada 10X ja vajadusel korrigeerida pH-d.

Võite teha PBS lahuse, mis sisaldab 0,5% Tween 20, lisades 1 ml lahusesse 5 ml Tween 20.

Näpunäiteid PBS puhvri valmistamiseks

Pärast puhverlahuse valmistamist hoia puhvrit toatemperatuuril.

Mitte veevabad reaktiivid võivad olla asendatud, kuid peate arvutama iga massi, et mahutada lisatud vesimolekulid.

Fosfaatpuhverdatud soolalahuse (PBS) kasutamine

Fosfaatpuhverdatud soolalahusel on palju kasutusvõimalusi, kuna see on isotooniline ja enamikele rakkudele mittetoksiline. Seda saab kasutada ainete lahjendamiseks ja seda kasutatakse sageli rakkude konteinerite loputamiseks. PBS-i võib lahustitena kasutada mitmesuguste meetodite abil biomolekulide kuivatamiseks, sest selles sisalduvad veemolekulid on struktureeritud näiteks aine-valgu ümber. See "kuivatatakse" ja immobiliseeritakse tahkele pinnale.

PH jääb stabiilseks ja ühtlaseks, et vältida rakkude hävitamist.

Õhuke aine, mis seondub ainega, takistab denatureerimist või muid konformatsioonilisi muutusi. Karbonaatpuhvreid saab kasutada samal eesmärgil, kuid vähem efektiivsusega.

Valgu adsorptsiooni mõõtmisel ellipsomeetris võib kasutada ka PBS-i, et võtta võrdluspektrit.