Seda puhvrit kasutatakse DNA liikumise uurimiseks
Selle puhvri väike ioontugevus ja väike puhverdusvõime. See sobib kõige paremini suure (> 20 kb) DNA osade elektroforeesi jaoks ja tuleb sagedamini asendada või ringlusse võtta pikemate (> 4 tunni) geeli töötamisaegadega.
Seda silmas pidades võiksite kaaluda puhvri mitut partiid.
Arvestades, et puhvrit on lihtne teha ja samme saab kiirelt läbi viia, ei tohiks korraga enam kui üks partii olla eriti aeganõudev või raske välja tõmmata. TAE puhvri tegemiseks peaks allpool toodud juhiste järgi võtma vaid 30 minutit. Nii toimige järgmiselt.
Valmistatakse EDTA varulahus
EDTA (etüleendiamiintetraäädikhappe) lahus valmistatakse enneaegselt. EDTA ei vii täielikult lahusesse, kuni pH on reguleeritud umbes 8,0-ni. 0,5 ml EDTA lahuses oleva 500-milliliitri põhilahuses kaalutakse 93,05 g EDTA dinaatriumsoola (FW = 372,2). Lahustage 400 ml deioniseeritud vees ja reguleerige pH naatriumhüdroksiidi (NaOH) abil. Lisage lahus 500 milliliitri lõppmahuni.
Tõmba üles TAE varulahus
Tehke kontsentreeritud (50x) TAE põhilahust, kaaludes 242 grammi Trisi alust (FW = 121,14) ja lahustades selle ligikaudu 750 milliliitri deioniseeritud vees.
Lisage ettevaatlikult 57,1 milliliitrit jää-hapet ja 100 milliliitrit 0,5 M EDTA (pH 8,0). Seejärel reguleerige lahus lõpliku mahuga 1 liitrit. Seda lähtelahust saab hoida toatemperatuuril. Selle puhvri pH ei ole kohandatud ja peaks olema umbes 8,5.
Valmistage TAE töölahus
1x TAE puhvri töölahus tehakse lahjendades põhilahust 50 korda deioniseeritud vees.
Lõplik lahustunud kontsentratsioon on 40 mM. Tris-atsetaat ja 1 mM EDTA. Puhver on nüüd valmis kasutamiseks agaroosgeelil.
Mida vajate puhvriks
Kuna TAE-puhvri tegemine nõuab ainult kiireid ja lihtsaid juhiseid, ei ole selle jaoks vajalike materjalide arv liiga suur. Teil on vaja ainult EDTA dinaatriumsoola, Trisi alust ja jää-äädikhapet.
Puhverdamine nõuab vajadusel ka pH-meeterit ja kalibreerimisstandardeid. Teil on vaja ka 600-milliliitri ja 1500-milliliitrilist keeduklaasi või kolbi ning gradueeritud balloone. Lõpuks vajate deioniseeritud vett, segage lauad ja segage plaate.
Pakkimine üles
Kust kavatsete puhvrit teha - kooli saidil, töökohal või mujal, näiteks kodus? Enne, kui hakkate veenduma, et kõik TAE puhvri materjalid on olemas, kontrollige seda.
Kui te ei soovi materjalide eest maksta, on soovitav teha puhver väljaspool oma kodu. Saate hõlpsasti tellida vajalikud materjalid veebis või külastada nende jaoks spetsiaalset poodi.