Samuti viidatakse kui RFLP analüüsile, kus meetod kasutab üksikute inimeste geneetiliste koodide polümorfismi . Kuigi liikide kõigil liikmetel on sisuliselt sama geneetiline koostis, mõjutavad need väikesed erinevused fenotüübi erinevusi, nagu näiteks välimus või ainevahetus üksikisikute vahel.
RFLP: analüüsimeetod ja rakendused
RFLP analüüsi tehnika hõlmab teatud piirkonna redutseerimist teadaoleva varieeruvusega, restriktsiooniensüümidega, seejärel DNA fragmentide eraldamist agaroosgeel-elektroforeesiga ning fragmentide arvu ja suhteliste suuruste määramist.
Restriktsiooniensüüm on ensüüm, valgumolekul, mis lõikab DNA restriktsioonisaitides. Sisuliselt lagundatakse ja lahustatakse DNA-proov restriktsiooniensüümide poolt. Saadud fragmendid eraldatakse vastavalt nende pikkusele ja fragmendi suurused erinevad iga testitava isiku jaoks.
Täielik RFLP-protsess nõuab sondi märgistamist, DNA fragmenteerimist, elektroforeesi, blotteerimist, hübridiseerimist, pesemist ja autoradiograafiat. Avastatud RFLP-d visualiseeritakse autoradiograafias kasutades röntgenkiirte, kus DNA fragmente saab vaadelda ja analüüsida, kui nad on elektroforeesi teel üksteisest eraldatud.
Mõned RFLP-analüüsi taotlused hõlmavad järgmist:
- DNA sõrmejäljendid . Kohtuekspertiisi teadlased võivad kasutada RFLP-analüüsi, et tuvastada kahtlusaluseid kuritegude ajal kogutud tõendite alusel.
- Isadust. RFLP kasutatakse ka isaduse kindlaksmääramisel või esivanema jälitamisel.
- Geneetiline mitmekesisus. Seda meetodit saab kasutada eluslooduse arengu ja rände uurimisel, loomupopulatsioonide aretamise mudelite uurimisel ja teatavate haiguste tuvastamisel ja diagnoosimisel.
RFLP-i alternatiivse genoomide avastamise meetod on genoomi kaardistamise ja geneetilise haiguse analüüsi oluline vahend. Kui mingis kindlas haiguse geenis leitakse teatud kromosoomi, siis uurivad teadlased haigusega perekonna liikmete DNA-d ja seejärel uurivad sarnaseid pärilikke mustreid RFLP-alleelides.
Kui haiguse geen on lokaliseeritud, võib RFLP analüüsi läbiviimine teistel pereliikmetel avaldada mutantsete geenide kandjat või üldise haigusseisundi signaali. Oluline on märkida, et RFLP-tehnikat ei kasutata praegu laialdaselt, kuna kohtuekspertiisi ja mitmete muude valdkondade DNA-analüüsi jaoks kasutatakse uuemaid ja tugevamaid meetodeid.
Analüüsi negatiivne külg
Kahjuks on RFLP analüüsi tehnika üllatav ja aeglane. Peale suure hulga proovi DNA nõudmise - proov peab tavaliselt olema ligikaudu neljandiku suurusest, mis on DNA proovide jaoks suhteliselt suur - protsess, alates sondi märgistamisest pesemiseni ja autoradiograafiast, võib kuluda kuni täiskuu lõpetamiseks.
Inimgenoomi projekti tulemused on RFLP vajadust suhteliselt asendanud. Projekt võimaldas määrata inimese rakkudes leiduva kogu DNA järjestuse, inimese genoomi ja kõigi geenide tuvastamiseks inimese genoomi.