Ensüümide kineetika mõõtmine
Nagu natuke taust, on ensüümid proteiinid, mis toimivad kui katalüsaatorid reaktsiooni tekkimiseks aktiveerimisenergia koguse vähendamisel. Aktiveerimenergia on energia, mis on vajalik reaktsioonide "alustamiseks" saamiseks, kuna paljud reaktsioonid ei esine väga kiiresti (või üldse mitte), kui need on termodünaamiliselt võimalik.
Ensüümid katalüüsivad konkreetseid reaktsioone konkreetses kohas (tuntud kui aktiivne koht), kus reagendid seonduvad ja reageerivad toodete genereerimiseks. Aluspinnal on aktiivsed saidid, mis on spetsiifilised ainult neile, nii et ükski teine aine ei seostaks ega reageeriks samas kohas. Nagu lukk ja võti, kitsendab iga ensüüm ainult ühte konkreetset reaktsiooni (mõningate eranditega).
Puhastamise protsendi märkimiseks kasutatakse eriaktiivsust proteiini eraldamise meetodites. Ensüümide ostmisel on oluline teada seda seadet, et täpselt näidata, kui palju puhast ensüümi saadate.
Ensüümi kineetika (substraadi või pinna ensüümi reaktsioonikiirus) määramisel määratletakse eriaktiivsus substraadi koguse järgi, mis ensüümi muundub (katalüüsitud reaktsioonid) ensüümi preparaadis mg valgu kohta ajaühiku kohta.
Näide konkreetsest tegevusest oleks:
- Iseseisva ensüümi spetsiifilist aktiivsust mõõdeti enne puhastamist 150 umoles / min valgu valgu kohta ja pärast puhastamist 800 umoli / min / mg.
Konkreetne aktiivsus on oluline ensüümi puhtuse näitaja. Erinevatel puhaste ensüümide partiidel peaks olema samad väärtused ja isegi ensüümi lahuse lahjendamisel on korduvalt identsed spetsiifilised aktiivsuse väärtused, kuigi seal on erinevad ensüümi aktiivsuse väärtused. Seda seetõttu, et konkreetse tegevuse arvutamisel mõjutab lugeja (ühikut / ml) ja nimetaja (mg / ml) võrdselt.
Konkreetne tegevus on tegevusest väga erinev, kuid konkreetse tegevuse arvutamine sõltub endiselt aktiivsuse väärtusest. See tähendab, et kindlaksmääratud spetsiifiline aktiivsus sõltub ka ensüümiüksuse määratlusest.
Erinevate aktiivsuste oodatust väiksemate ensüümide partiid võivad sisaldada ensüümmolekule, mis on muutunud või segatud lisanditega.
Ensüümide aktiivsust mõjutavad tegurid
On võimalik, et ühes ensüümis võib eri laborites mõõdetud aktiivsuse väärtused olla erinevad (st tegelikud erinevused mõõdetud aktiivsuses, mitte erinevad ühikuväärtuste kasutamisel ilmnevad erinevused).
Meetod, kuidas testi tehakse (ensüümide puhtuse määramise testimise meetod) mõjutab teatatud aktiivsuse väärtusi. Näiteks on ensüümid üldiselt aktiivsemad 37 ° C temperatuuri ja 20 ° C vahel, nii et kui analüüs viiakse läbi temperatuuril 21 ° C, erinevad väärtused temperatuuril 32 ° C (tavaliselt , testid viiakse läbi temperatuuril vahemikus 20-37 ° C).
Seega oleks ensüümiühiku määratlus paremini väljendatud kui 1 ühikut (U) on ensüümi kogus, mis katalüüsib 1 nmol substraadi reaktsiooni minutis standardsetes tingimustes.