Kuidas bakterikultuuri külmkuivatada (lüofiliseerimine)

Lüofiliseerimine või külmkuivatamine on lühike laboratoorne protseduur

Külmkuivatamine, mida nimetatakse ka lüofiliseerimiseks või krüsodeksikatsiooniks, on toote eemaldamise protsess pärast külmutamist (ja siis pannakse see vaakumi alla), mis võimaldab jääl eemaldada tahkest aurust ilma vedelas faasis. Jää (või muud külmutatud lahustid) eemaldatakse saadusest sublimatsiooni protsessist ja seotavad vee molekulid eemaldatakse desorptsiooniprotsessi käigus.

Lüofiliseerimise alused

Üks parimaid viise bakteriaalsete, seente, pärmide või muude mikroorganismide kultuuri pika aja vältel säilitamiseks on kasutada külmkuivatamise protsessi. Seda lühikest laboratoorset protseduuri saab teha mis tahes kaubanduslikult saadaval oleva külmkuivatiga, mis säilitab teie kultuurikoguse. Kuna lüofiliseerimine on kõige keerukam ja kallim kuivatusviis, piirdub see protsess suuresti tundlike, kuumustundlike ja väärtuslike materjalidega. Aineid, mida külmumiseta ei kahjustata, võib tavaliselt lüofiliseerida, nii et külmhoidlad ei ole vajalikud.

See protsess võib kesta nii vähe kui kolm tundi ja kuni 24 tundi, välja arvatud kultuuri kasvu aeg.

Lüofiliseerimise samm-sammuline protsess

1. Esiteks, kasvatage LB või mõne muu asjakohase toitainegaarplaadi mikroorganismi üleöö kultuuri või muru.

2. Seejärel valmistatakse enne kellaaega autoklaavimist steriilsed surutud viaalid viaalid, kusjuures mütsid (kummikorkid) asetsevad vabalt peal. Paigaldage paberilehed, mis on trükitud kultuuri identifitseerimisnumbritena enne autoklaavimist. Teise võimalusena võite kasutada steriilsusega kapslitega kapsleid .

1. Lisage plaadile 4 ml lüofiliseerimispuhvrit. Vajadusel saab rakke steriilse klaasvarda abil suspendeerida.

2. Kultiveeritud suspensioon viiakse kiiresti steriliseeritud viaalidesse. Lisage umbes 1,5 ml viaali kohta. Kleepige kummikork kinni.

3. Külmutage kullasuspensioon viaalides, asetades viaalid -20 kraadi Celciuse sügavkülmikusse.

1. Kui kultuurid on külmunud, valmistatakse külmutusseade, keerates selle ja võimaldades aega, et stabiliseerida sobiv temperatuur ja vaakumitingimused. Tehke seda vastavalt konkreetse külmutite kaubamärgi tootja juhistele, mida kasutate.

2. Ettevaatlikult ja aseptiliselt asetage viaalikotte vabalt viaalide peal, nii et külmkuivatusprotsessi vältel saaks niiskus välja põgeneda ja asetage viaalid külmkuivati ​​kambrisse. Kandke vaakum kambrisse vastavalt tootja juhistele.

3. Lase kultuuri ajal täielikult lüofiliseerida (kuivatada). See võib võtta paar tundi kuni üleöö, sõltuvalt iga proovi mahust ja sellest, kui palju proove olete.

4. Eemaldage külmkuivati ​​kambrist võetud proovid vastavalt tootja juhistele ja vahetage viaalid koheselt kummikorkide ja seejärel kummikorkide vahele.

5. Säilitage lüofiliseeritud kultuuri kollektsioon toatemperatuuril.

Tooted, mida vajate

• Külmutuskuivati
• Toitained või muud sobivad agarplaadid (ja kultuuride kasvatamise inkubaator)
• Klaasist vard
• Lüofiliseerimispuhver
• Kummikorkidega suletavad kummikorkad viaalid (ja korkide kinnitamiseks kummipael)
• Sügavkülmik

<sub>Viide:

SP Scientific. Külmkuivatamise põhiprintsiibid. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>